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分光光度计工作方法和特点,光度计工作原理性能特点

发布时间:2024-06-06 09:30:02人气:

分光光度计工作方法和特点,光度计工作原理性能特点(图1)

仪器组成  分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白   定量以及细菌生长浓度的定量。   仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。 光谱范围  包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200~400 nm的紫外光区.不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源.   钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400~760nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红橙,黄绿,蓝靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源.   氢灯(或氘灯)的发射光谱:氢灯能发出185~400 nm波长的光谱可作为紫外光光度计的光源.   物质的吸收光谱(1)   如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液,此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱它出现了几条暗线,即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱.   不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质.   物质的吸收光谱(2)   当光线通过某种物质的溶液时透过的光的强度减弱.因为有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被组成此溶液的物质所吸收只有一部分光可透过溶液.   入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透过光   如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的损失则:   入射光 = 吸收光 十 透过光 试验方法  分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。   单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式:   A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc   式中 :A 为吸光度;   I。为入射的单色光强度;   I 为透射的单色光强度;   T 为物质的透射率;   k 为摩尔吸收系数;   L 为被分析物质的光程,即比色皿的边长   c 为物质的浓度   物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,故测定时应用标准品或对照品同时操作。 仪器特点  1、采用高性能优质光栅,波长精度更高;   2、采用进口钨灯,发光效率高,使用寿命长,功耗降低;   3、超大规模集成,T/A转换精度高,稳定性高;   4、微机系统的应用,使操作使用简单可靠。 分光光度计的维护使用

  在使用分光光度计时,我们必须要注意一些使用后的维护,保养,和一些基本使用注意事项,才能达到更好的使用效果。

  分光光度计的使用维护:

  1、使用的吸收池必须洁净,并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。

  2、取吸收池时,手指应拿毛玻璃面的两侧,装盛样品以池体的4/5为度,使用挥发性溶液时应加盖,透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净,检视应无溶剂残留。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净,晾干防尘保存。

  3、供试品溶液浓度除各该品种已有注明外,其吸收度以在0.3~0.7之间为宜。

  4、测定时除另有规定外,应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照,采用1cm石英吸收池,在规定的吸收峰±2nm以内,测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定,以核对供试品的吸收峰位置是否正确,并以吸收度*大的波长作为测定波长,除另有规定外吸收度*大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内。

  5、供试品应取2份,如为对照品比较法,对照品一般也应取2份。平行操作,每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。

  6、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度,否则测得的吸收度值会偏低,狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准,对于大部分被测品种,可以使用2nm缝宽。

  7、单色器是仪器的核心部分,装在密封盒内不能拆开,为防止色散元件受潮发霉,必须经常更换单色器盒干燥剂。

  8、光电转换元件不能长时间曝光,应避免强光照射或受潮积尘。

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